Из материалов отчетов «Гигиеническая оценка биологически активной добавки к пище «Литовит»

БАД серии ЛИТОВИТ в каталоге >>>

Тутельян В.А., Батурин А. К., Аксюк И. Н., Москва, 1997 - 2000 гг.

Результаты проведенных санитарно-химических исследований показали соответствие нового препарата медико -биологическим требованиям, предъявляемым к данному виду продуктов.

Токсиколого-гигиенические исследования препарата «Литовит».

Для изучения безвредности препарата «Литовит» был поставлен эксперимент продолжительностью 1 месяц на крысах самцах линии ВИСТАР. Животные получали «Литовит» на фоне общевиварного рациона в дозировках: 70 мг/кг (группа 1), 700 мг/кг (группа 2).

Исследования показали, что общее состояние животных всех групп было удовлетворительным на протяжении всего эксперимента. Внешний вид, поведение, состояние шерстного покрова, двигательная активность опытных групп не отличалось от контроля. Относительная масса внутренних органов (печени, почек, селезенки, сердца, семенников, семенных пузырьков и тимуса) в опытных группах достоверно не отличалась от контроля. Включение в рацион крыс препарата «Литовит» в дозе 70 мг/кг и 700 мг/кг не оказало влияния на абсолютную массу печени, почек, селезенки, сердца, семенников, семенных пузырьков, гипофиза, предстательной железы и тимуса.

Исследование биохимических показателей показало:

• содержание общего белка в сыворотке крови крыс при включении в их рацион препарата «Литовит» было статистически достоверно увеличено при дозе 70 мг/кг составило 10,5%, а при дозе 700 мг/кг - 14%;
• включение в суточный рацион препарата «Литовит» в дозе 70 мг/кг и 700 мг/кг на протяжении 1 месяца не влияло на содержание глюкозы в сыворотке крови крыс. Содержание глюкозы в сыворотке крови опытных крыс достоверно не отличалось от контроля;
• включение в суточный рацион препарата «Литовит» в указанных дозировках не оказало влияние на такие показатели мочи, как: относительная плотность мочи, рН мочи, суточный диурез, содержание креатина в моче. Эти показатели в опытных группах статистически достоверно не отличаются от контроля;
• активность ферментов (аланинаминотрансфераза, аспартатаминотрансфераза, щелочная фосфатаза) сыворотки крови крыс при включении в их рацион препарата «Литовит» статистически достоверно не отличалась от контроля;
• активность аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы в печени крыс при включении в их рацион препарата «Литовит» в дозе 70 мг/кг и 700 мг/кг статистически достоверно не отличалась от контроля.

Исследование минерального состава сыворотки крови, мочи, кала и некоторых органов крыс.

В связи с тем, что в составе препарата «Литовит» входит стандартная составляющая цеолита Холинского месторождения, которая содержит минеральные вещества и обладает ионообменными свойствами, целесообразным было изучение минерального состава некоторых органов крыс, мочи, кала и сыворотки крови. Исследования показали, что введение в рацион крыс препарата «Литовит» в дозе 70 мг/кг не привело к изменению содержания натрия, калия, кальция, магния, железа, меди, цинка, свинца, и кадмия в моче крыс. Введение в рацион крыс препарата «Литовит» в дозе 700 мг/кг привело к статистически достоверному снижению содержания в моче калия на 42%, кальция на 64,1%, магния на 69,2%, железа на 41,1%. При этом наблюдалось и статистическое достоверное снижение выделения с мочой в сутки кальция на 83,8%, магния на 85,6%, железа на 65,8% и меди на 44,2%.

В связи с тем, что наблюдается снижении экскреции с мочой некоторых минеральных веществ при введении в организм крыс препарата «Литовит», необходимо было выяснить возможность накопления этих веществ в органах крыс. Данное исследование показало, что не обнаружено статистически достоверное различие в содержании натрия, калия, кальция, магния, железа, свинца, кадмия, меди и цинка в печени контрольных крыс и крыс, получавших препарат «Литовит» в дозе 70 мг/кг и 700 мг/кг массы крысы в сутки.

Исследование содержания минеральных веществ (натрия, калия, кальция, магния, железа, свинца, кадмия, меди и цинка) в почках крыс при включении в их рацион препарата «Литовит» показало, что не обнаружено статистически достоверных различий в содержании указанных микроэлементов в почках контрольных крыс и крыс, получавших препарат «Литовит» в дозе 70 мг/кг и 700 мг/кг.

Исследование содержания минеральных веществ - натрия, калия, магния, железа, свинца, кадмия, меди и цинка в сыворотке крови опытных животных не показало достоверных различий от контроля.

Т.о., снижение выделения с мочой калия, кальция, магния, железа, меди и снижение выделения с калом магния при включении в рацион крыс препарата «Литовит» в дозе 700 мг/кг не приводит к увеличению содержания этих элементов в печени, почках и сыворотке крови крыс.

Это еще раз подтверждает ионообменные свойства цеолитсодержащих продуктов и дает основание к проведению клинических исследований при состояниях, сопровождающихся нарушениями минерального обмена.

Изучение влияния введения в рацион крыс препарата «Литовит» в дозах 70 мг/кг и 700 мг/кг на обеспеченность витаминами B₁, B₂ и B₆ у животных с исходной недостаточностью указанных витаминов показало, что присутствие препарата в рационе не приводило к дальнейшему ухудшению обеспеченности указанными витаминами. Некоторое увеличение содержание этих витаминов в печени позволяет считать, что этот препарат способствует некоторому улучшению обеспеченности организма данными нутриентами.

Иммунологические исследования.

Исследование концентрации иммуноглобулинов основных классов (Jg G, Jg A, Jg M) в сыворотке крови крыс опытных групп не показало достоверных различий от контроля. При определении в сыворотке крови отдельных компонентов комплемента (С3, С4, С5, С9) не выявлено достоверных различий между опытными и контрольными группами.

Включение в рацион крыс препарата «Литовит» в дозировках 70 мг/кг и 700 мг/кг не привело к статистически достоверному изменению содержания белков (альбумин, гамма- глобулины, бета- глобулины, альфа-1 глобулины, альфа-2 глобулины, трансферрин, церуллоплазмин, С- реактивный белок) в крови.

Исследование гематологических показателей показало, что включение в рацион крыс препарата «Литовит» в количестве 700 мг/кг наблюдалось статистически достоверное увеличение концентрации гемоглобина. Остальные исследуемые показатели (общее количество эритроцитов, гематокритная величина, ССЭ, СКЭ, СОЭ, общее количество лейкоцитов) в опытных группах статистически достоверно не отличались от контроля и находились в пределах физиологических норм. При окраске по Романовскому Гимза эритроциты у всех крыс были правильной формы, обычных размеров, разовокрасного цвета.

Исследование влияния «Литовита» на лейкоцитарную формулу крыс показало, что у животных, получавших препарат в дозе 700 мг/кг выявлено статистически достоверное увеличение относительного количества лимфоцитов, при этом абсолютное количество лимфоцитов у животных этой группы не отличалось от контроля.

Следует отметить, что выявленные изменения гематологических показателей у животных, получавших «Литовит» в дозе 700 мг/кг (увеличение концентрации гемоглобина, относительного содержания лимфоцитов) находилась в пределах физиологических норм для данного возраста крыс линии ВИСТАР.

Изучение отдаленных последствий действия препарата «Литовит» (эмбриотоксическое, гонадотоксическое и тератогенное действие).

В связи с тем, что в состав «Литовита» входит цеолит, который является нетрадиционным пищевым компонентом, согласно рекомендациям ВОЗ и требованиям Минздрава России необходимо изучение отделенных последствий действия цеолита на организм. Целью проведения данных исследований явилось изучения влияния препарата «Литовит» на потомство, полученное от лабораторных животных (крыс линии ВИСТАР), в корм которым вводили препарат в дозах 70 и 700 мг/кг массы крысы в сутки.

Результаты исследования показали, что на протяжении всего эксперимента общее состояние животных было удовлетворительным (самцов, самок и потомства). Установлено, что включение в рацион крыс препарата «Литовит» в количестве 70 и 700 мг/кг в сутки эмбриотоксического действия не вызывает. Смертность эмбрионов до и после имплантации и общая эмбриональная смертность в опытных группах статистически достоверно не отличается от контроля и эти показатели находились в пределах физиологических норм для данного вида животных.

При исследовании плодов на серии сагитальных срезов аномалий развития не обнаружено.

Не обнаружено статистически достоверной разницы между опытными и контрольной группами по таким показателям как: количество родивших самок, количество крысят, родившихся у одной самки, масса потомства и выживаемость потомства на 30 день. Потомство всех групп развивалось нормально: открытие глаз, прорезывание резцов, покрытие шерстью и отлипание ушных раковин проходило в сроки, соответствующие физиологическим нормам.

Исследование молекулярных и клеточных механизмов влияния на организм БАД к пище «Литовит».

Для решения вопроса о возможности использования «Литовита» в качестве БАД к пище необходимо было иметь достоверные представления о характере и механизме влияния его на организм. С этой целью исследовалась способность «Литовита»:

• активировать фагоциты;
• оказывать цитотоксический эффект;
• вызывать гемолиз эритроцитов;
• обуславливать каталитическую трансформацию активных форм кислорода;
• усиливать перекисное окисление липидов;
• провоцировать гипертрофию фагоцитов;
• производить мутагенные изменения в соматических клетках.

Характер активации фагоцитов препаратом «Литовит» исследовался методом хемилюминесценции (ХЛ), т.е. регистрации сверхслабого свечения, возникающего при контакте частиц с клеточной мембраной. Показано, что «Литовит» вызывает медленный ХЛ- ответ. Такой характер активации клеток относится к наиболее физиологичному варианту. Макрофаги при этом длительное время остаются жизнеспособными и адекватно отвечают на дополнительный стимул. Т.о., «Литовит» вызывает активацию фагоцитов физиологического типа и обладает низким уровнем цитотоксичности.

Исследование степени цитотоксичности показало, что «критическая» концентрация «Литовита», вызывающая максимальное свечение суспензии макрофагов, равняется 0,8 мг/мл, что характерно для частиц с низкой степенью токсичности. Низкая цитотоксичность «Литовита» установлена двумя различными методическими приемами, что придает результатам исследований особую достоверность.

Характеристика гемолитической активности «Литовита»

Наиболее важные клетки крови человека, выполняющие несколько жизненноважных функций (дыхательную, питательную, защитную, ферментативную) - эритроциты.

Процесс разрушения эритроцитов с выделением из них в окружающую среду гемоглобина называется гемолиз.

ГЕМОЛИЗ

При изучении новых пищевых продуктов или лекарственных средств важно, чтобы продукт не вызывал патологический гемолиз.

Данное исследование показало, что «Литовит» не обладает гемолитической активностью, как в воздушной, так и бескислородной среде, т.е. «Литовит» полностью лишен гемолитической активности.

Каталитическая способность

Биологическое влияние нерастворимых частиц «Литовита» - природного минерала цеолита - может быть обусловлено каталитическими свойствами его поверхности, содержащей ионы переходных металлов - железа и др. Цеолит, проходя через кислотную среду желудка, где концентрация соляной кислоты может быть весьма высокой, образует водородные формы минералов с активными центрами - микроэлементами: никель, медь, кобальт, марганец, железо, цинк и т.д., которые участвуют в биокаталитических превращениях.

На основании результатов исследований, полученных ранее: минералы, обладающие выраженной «пероксидазной» активностью, характеризуются высокой цитотоксичностью и являются потенциальными мутагенами и канцерогенами.

При высокой «каталазной» активности минералы, напротив, отличаются низкой цитотоксичностью и стимулируют кислородзависимую бактерицидную систему фагоцитов, не нанося вреда окружающим тканям.

Цеолиты, имеющие подобные характеристики, оказывают антимикробный эффект и при использовании в качестве кормовой добавки в птицеводстве и животноводстве повышают выживаемость молодняка.

В результате исследований выявлено, что для «Литовита» характерен «каталазный» тип каталитической активности. Активность «пероксидазного» типа выражена слабо.

Влияние на перекисное окисление липидов (ПОЛ) в плазме

Уровень ПОЛ в плазме был оценен по накоплению малонового диальдегида (МДА). Исследования показали, что «Литовит» незначительно (на 21,1%) увеличивает концентрацию МДА в плазме, повышая уровень ПОЛ ее липидов.

Влияние его сопоставимо с воздействием кварца и в 6,5 раза меньше, чем дает инкубация плазмы асбестом. Последнее обусловлено свойственной асбесту высокой каталитической активностью «пероксидазного» типа, ведущей к повышенному образования гидроксильного радикала - главного инициатора ПОЛ.

Возможность генотоксического действия

Способ выявления генотоксичности основан на способности твердых частиц вещества вызывать образование гидроксильных радикалов, повреждающих 2-дезокси-Д-рибозу (ДОР), которая является обязательной составной частью ДНК. Степень повреждения ДОР служит мерой потенциальной опасности исследуемого образца для генетических структур клетки.

Исследования позволяют отнести «Литовит» к продуктам с низкой генотоксичностью, отпределяемой по деградации рибозы (ДОР), являющейся обязательной составной частью ДНК. Уровень дегидрадации исследуемого образца «Литовит» в два раза меньше, чем у кварца и в 7,5 раза меньше, чем у асбеста.

Мутагенное влияние на соматические клетки

При активации фагоцитов частицами «Литовита» образуются активные формы кислорода, способные привести к зависимому от величины дозы и времени экспозиции увеличению количества клеток с хромосомными аберрациями. Оценка возможных генетических эффектов «Литовита» была получена при использовании эукариотических тест -систем, моделирующих контакт частиц «Литовита» с клетками, генерирующими АФК.

Результаты исследований показали, что мутагенное воздействие «Литовита» невелико, выявляется только под воздействием высокой дозы препарата. Как и при краткосрочной культивации цельной крови человека, так и в тесте на генотоксичность влияние «Литовита» сопоставимо с воздействием кварца. Последний, как известно, исследован многократно и не относится к числу значимых мутагенов.

Развитие внутриклеточной рабочей гипертрофии фагоцитов

Фагоцитоз частиц практически нерастворимых веществ сопровождается возрастанием количества и размером внутриклеточных органелл, особенно лизосом и митохондрий, а также гипертрофией самой клетки. Этот процесс выражен тем больше, чем дольше поглощенные частицы не вызывают развития энергодефицитного состояния и разрушения фагоцита. Поэтому по степени выраженности внутриклеточной рабочей гипертрофии фагоцитов можно судить о характере биологического влияния и уровне цитотоксичности нерастворимых частиц.

Результаты исследования показали, что не выявлено деструктивных макрофагов с частицами «Литовита» в цитоплазме ни в какой из периодов наблюдения (от 3 до 48 часов). Цитотоксическое воздействие «Литовита» в эксперименте не обнаружено.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ГИГИЕНИЧЕСКОЙ ОЦЕНКЕ БАД «ЛИТОВИТ»

Методом индуцированной хемилюминесценции показано, что «Литовит» вызывает активацию макрофагов, относящуюся к наиболее физиологичному медленному варианту, при котором клетки длительное время остаются жизнеспособными и адекватно отвечают на дополнительный стимул. Индекс активации макрофагов (Т_хл) у «Литовита» равен 0,4; у угля - 0,3; у кварца - 24,4; асбеста - 81,0. По этим данным «Литовит», как и уголь, обладает низкой цитотоксичностью.

Указанный прогноз подтверждается наиболее универсальным методом определения уровня цитотоксичности по величине «критической» концентрации, вызывающей максимальное свечение стандартной суспензии макрофагов. У «Литовита» «критическая» концентрация равна 0,8 мг/мл, что характерно для частиц с низкой степенью цитотоксичности. Аналогичную величину «критической» концентрации и цитотоксичности имеет уголь. Вместе с тем, биологическая активность «Литовита» выше, чем у угля, т.к. интенсивность свечения клеток на уровне «критической» концентрации у «Литовита» - 7,77, а у угля - 3,91.

На низкий уровень цитотоксичности «Литовита» указывают результаты не только биохимических, но и морфологических методов исследования, в частности, данные определения гипертрофии и дисфункции макрофагов. При внутрибрюшинном введении «Литовита» не выявлено деструктивных перитонеальных макрофагов с его частицами в цитоплазме за весь 48 часовой период наблюдения. Иными словами, цитотоксическое влияние «Литовита» на фагоцитирующие клетки в этом эксперименте не обнаружено.

Низкая цитотоксичность «Литовита» установлена тремя различными способами, что придает полученным результатам особую достоверность.

Наряду с определением уровня цитотоксичности «Литовита» по отношению к фагоцитирующим клеткам, было исследовано его влияние на эритроциты в связи со специфической функцией этих клеток и своеобразием их строения. Оказалось, что оптическая плотность супернатанта в эксперименте с «Литовитом» не превышала ее при спонтанном гемолизе как в воздушной среде, так и в бескислородных условиях. Следовательно, в данном эксперименте «Литовит» практически не обнаружил гемолитической активности.

Каталитическую способность частиц «Литовита» показали специальные исследования. Поверхность «Литовита» обладает двумя видами каталитической активности. Светосумма свечения, обусловленная пероксидазным типом каталитической способности «Литовита», оказалось очень небольшой - 0,423. Следовательно, только 0,085% пероксида водорода разлагается с образованием свободных радикалов. «Литовит» отличается крайне низкой «пероксидазной» активностью.

Во-вторых, поверхность частиц «Литовита» может разлагать пероксид водорода без образования свободных радикалов, подобно ферменту каталазе - «каталазная активность». Изменение светосуммы свечения, обусловленное каталазным типом каталитической способности «Литовита», гораздо более значительно и равняется 205,6. А это значит, что 41,3% пероксида водорода разлагается на его поверхности без образования свободных радикалов. Каталазный тип каталитической активности является преобладающим для «Литовита» и в сотни раз превышает его «пероксидазную» активность. Как известно, вещества, отличающиеся высокой «каталазной» активностью, характеризуются низкой цитотоксичностью и стимулируют кислородзависимую бактерицидную систему фагоцитов, не нанося вреда окружающим тканям.

Влияние «Литовита» на уровень перекисного окисления липидов (ПОЛ), определяемое по накоплению малонового диальдегида (МДА) в плазме крови, оказалось невелико: концентрация МДА возросла на 21,1%. Этого следовало ожидать, имея ввиду низкий уровень «пероксидазной» активности «Литовита».

Мутагенное воздействие «Литовита», исследованное в краткосрочной культуре цельной крови человека, показало статистически значимое увеличение числа хромосомных аберраций (5,2 на 100 клеток) при воздействии его высокой дозы - 0,05 мг/мл. Подобное влияние оказывает кварц (5,0 на 100 клеток). То обстоятельство, что по числу хромосомных аберраций «Литовит» сравним с кварцем, а по генотоксичности в два раза менее активен, обусловлено, по-видимому, суммированием в культуральном тесте влияния как активных форм кислорода, так и продуктов ПОЛ. Влияние «Литовита» для генетических структур соматических клеток подобно кварцу, который, как известно, не относится к числу опасных мутагенов.

Т.о., результаты проведенных исследований показали, что нет причин ожидать каких-либо негативных последствий от применения «Литовита» в качестве биологически активной добавки к пище. Напротив, свойственный ему физиологический тип активации фагоцитирующих клеток может обусловить бактерицидный эффект в просвете кишечника, так и ряд других полезных последствий.

Вместе с тем, входящий в состав «Литовита» цеолит (стандартная составляющая цеолита Холинского месторождения) является представителем класса минералов, включающего более 30 разновидностей, значительно отличающихся по своим химическим и биологическим свойствам. ПОЭТОМУ ОПРОБИРОВАННЫМ МОЖНО СЧИТАТЬ ТОЛЬКО ТОТ КОНКРЕТНЫЙ ВИД ЦЕОЛИТА, КОТОРЫЙ ВХОДИТ В СОСТАВ «ЛИТОВИТА».

Задачей второго этапа исследований было изучение гигиенической оценки БАД к пище «Литовит» на потомство. Токсикологические исследования выполняли на крысах линии Вистар, две опытные и одна контрольная группы. Опытным животным 1-ой группы на фоне общевиварного рациона включали «Литовит» в количестве 70 мг/кг массы тела в сутки (оптимальная доза), 2-ой опытной группе - 700 мг/кг массы тела (агравированная доза). Самцы и самки получали препарат 30 дней до спаривания, во время спаривания, во время беременности. Получено потомство от всех трех групп крыс. Токсиколого-гигиенический эксперимент проведен на потомстве. Потомство после прекращения питанием молоком матери получали препарат до трехмесячного возраста.

Через 3 месяца от рождения потомства проведен забой животных. Изучали:

• ряд интегральных показателей: общее состояние животных, поведение, состояние шерстного покрова, масса тела, относительная масса внутренних органов;
• биохимические показатели, характеризующие обмен веществ, функциональное состояние органов и систем крыс: содержание общего белка, глюкозы, активность аминотрансфераз, щелочной фосфатазы в сыворотке крови, содержание креатина в моче; гематологические показатели - концентрация гемоглобина, общее количество эритроцитов, гематокритная величина, среднее содержание гемоглобина в одном эритроците, средний объем эритроцитов, показатели лейкоцитарной формулы;
• иммунный статус животных оценивали по реакции бласттрансформации лимфоцитов (% активированных клеток) и реакции торможения миграции лейкоцитов; по содержанию в сыворотке крови иммуноглобулинов основных классов, по содержанию в сыворотке крови некоторых компонентов комплемента;
• проводили макро- и микроскопические исследования внутренних органов.

Особое внимание было уделено определению содержания минеральных веществ в печени, почках, костной ткани, сыворотке крови и выведению их с мочой и калом.

По большинству исследованных в эксперименте показателей, отражающих состояние органов и систем организма, обмен веществ, не обнаружено статистически достоверной разницы между опытными группами и контролем.

Так, не обнаружено разницы между опытными группами и контролем по интегральным показателям (рост, развитие животных, активность, состояние шерстного покрова, масса тела крыс, абсолютная и относительная масса внутренних органов). Введение в рацион крыс препарата «Литовит» как в оптимальной, так и в агравированной дозе не оказало влияния на гематологические показатели периферической крови (концентрацию гемоглобина, среднее содержание гемоглобина водном эритроците, среднюю концентрацию гемоглобина в одном эритроците (СКЭ), средний объем одного эритроцита) и лейкоцитарную формулу, не привело к статистически достоверным изменениям показателей гуморального иммунитета (иммуноглобулинов основных классов), компонентов комплимента и некоторых показателей клеточного иммунитета (реакция бласттрансформации лимфоцитов и реакция торможения миграции лейкоцитов).

При морфологическом и исследовании внутренних органов крыс (макроскопическом и микроскопическим) не выявлено разницы между опытными группами и контролем.

Анализ содержания минеральных веществ в сыворотке крови показал, что введение в рацион крыс препарата «Литовит» не приводит к изменению содержания в ней натрия, калия, магния, меди, цинка, свинца и кадмия по сравнению с контролем.

Однако, наблюдается статистически достоверное увеличение содержания кальция в сыворотке крови при введении в рацион крыс препарата «Литовит» как в оптимальной, так и в агравированной дозе. Это увеличение не является дозозависимым. Так введение в рацион крыс 70 мг/кг препарата привело к увеличению содержания кальция на 27,8%, а введение 700мг/кг препарата - на 14,5%.

Кроме того, введение в рацион крыс препарата «Литовит» в дозе 70 мг/кг привело к статистически достоверному увеличению содержания железа в сыворотке крови, что в процентах составило 39,1%. В случае железа отсутствует дозовая зависимость увеличения содержания его в сыворотке крови. Данный факт коррелирует с ранее проведенным исследованиями природных цеолитов и показывает ионообменные свойства последних.

Вывод: введение в рацион крыс (самцов и самок) препарата «Литовит» в дозах 70 мг/кг и 700 мг/кг массы крысы в сутки (крысы получали препарат на протяжении одного месяца до спаривания, во время спаривания, во время беременности; потомство получали препарат до трехмесячного возраста) не оказало отрицательного влияния на рост и развитие потомства, массу потомства, абсолютную и относительную массу внутренних органов потомства, гематологические показатели периферической крови, иммунный статус, морфологические показатели внутренних органов.

Третий этап исследований заключался в изучении влияния препарата «Литовит» на лабораторных животных при длительном его применении. Лабораторные животные (потомство крыс) были получены от родителей, которым в течение месяца в рацион включали «Литовит». Потомство получало «Литовит» в течение 7 месяцев. Через 7 месяцев животные были забиты.

В течение всего опытного периода велось наблюдение за общим состоянием животных, их внешним видом, поведением, изменением массы тела. Изучен ряд биохимических показателей, характеризующих обменные процессы в органах и системах крыс: содержание общего белка, глюкозы, активность щелочной фосфатазы и аминотрансфераз в сыворотке крови, содержание креатина в моче, определение активности аминотрансфераз в печени. Проведено определение содержания минеральных веществ в сыворотке крови, почках, печени, костной ткани, моче и кале. Дана оценка иммунного статуса: компетентность клеточного иммунитета оценивали по реакции бласттрансформации лимфоцитов (% активированных клеток) и реакции торможения миграции лейкоцитов. Гуморальный иммунитет оценивали по содержанию в сыворотке крови крыс иммуноглобулинов основных классов, содержанию компонентов комплемента. Изучены гематологические показатели периферической крови: концентрация гемоглобина, общее количество эритроцитов, гематокритная величина, среднее содержание гемоглобина в одном эритроците, средний объем эритроцита, показатели лейкоцитарной формулы. Определено содержание гормонов. Проведено макроскопическое исследование всех внутренних органов крыс и макроскопическое исследование печени, почек, селезенки, легких, семенников, кишечника.

Большинство изученных показателей у животных обеих опытных групп не изменялось по сравнению с контролем. Отмечено снижение массы тела у животных 1-ой опытной группы, получавшей 70 мг/кг препарата «Литовит» через 5 и 6 месяцев от начала эксперимента на 15,2% - 10,3%; у животных 2-ой группы, получавшей 700 мг/кг «Литовита» через 5 месяцев наблюдалось увеличение массы на 11,2%.

При изучении биохимических показателей было выявлено увеличение содержания общего белка в сыворотке крови у животных 1-ой группы на 16%, а у животных 2-ой группы на 25,8%, в то время как через 3 месяца опыта содержание общего белка сыворотки крови 2-ой опытной группы было статистически достоверно снижено на 13,3%. Наблюдалось увеличение содержания глюкозы в сыворотке крови на 25,7%, у животных, получавших агравированную дозу «Литовита», недостоверное снижение активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови на 19,2%. Особое внимание, как и на ранних сроках эксперимента, было обращено на содержание микро-, макроэлементов в разных органах, в сыворотке крови, моче и кале животных.

Содержание минеральных веществ в сыворотке крови, печени и костной ткани у крыс опытных групп не отличалось от контроля, тоже самое наблюдалось и по содержанию минеральных веществ в моче у крыс 1-ой опытной группы. Содержание кальция в сыворотке крови, моче и костях менялось на протяжении эксперимента. Следует отметить, что через месяц в моче и сыворотке крови отмечалось снижение содержания кальция и оно было достоверным в группе, получавшей агравированное количество «Литовита», определялась тенденция снижения его содержания в кости. Через три месяца опытного периода наблюдалось увеличение содержания кальция в моче и сыворотке крови при включении в рацион крыс препарата «Литовит» по сравнению с контролем (статистически достоверное) и снижение содержания этого элемента в органах (печень, кость), однако статистически недостоверное. Дозозависимый эффект при этом отсутствовал. Через 7 месяцев эксперимента выявлена разница в содержании кальция в сторону уменьшения только в почках обеих опытных групп и в группе, получавшей 70 мг/кг уменьшение составило на 35,7% по сравнению с контролем и в группе, где в рацион включалось 700 мг/кг - 30,4%. В кости содержание кальция не отличалось от контроля. Только во второй опытной группе обнаружено достоверное снижение выведения из организма с мочой натрия на 55,3%, железа - на 45,5% и цинка на 48,7% по сравнению с контролем. У животных первой опытной группы эти показатели не менялись по сравнению с контролем. С калом достоверно увеличивалось выделение магния, кадмия, меди в обеих опытных группах по сравнению с контролем, причем в первой опытной группе (70 мг/кг) в больших процентах: магния на 82,4% (опыт 1) и на 64,8% (опыт 2); кадмия соответственно на 95,3% и на 45%; меди - на 67,1% и на 45%. Введение «Литовита» в течение трех месяцев в рацион крыс в агравированной дозе приводило к статистически достоверному увеличению в кале железа, что составило 71,0% по сравнению с контролем.

ВЫВОДЫ:

1. БАД к пище «Литовит», изученный в 7-ми месячном токсикологическом эксперименте на крысах, не обладает токсическими свойствами. Не выявлено его отрицательного влияния на ряд интегральных тестов, показателей, характеризующих обменные процессы и состояние внутренних органов и систем гематологические показатели периферической крови, иммунный статус, морфологию внутренних органов.
2. Изучение отдаленных последствий показало, что продукт не обладает гонадотоксичным, эмбриотоксическим и тератогенным действием при введении его в рацион крыс в дозах 70 и 700 мг/кг.

Итак, только получив абсолютные доказательства безопасности новый продукт - БАД к пище «Литовит» - ЗАО НПФ «НОВЬ» было выдано регистрационное удостоверение № 72-ЦГС-2373 от 22.05.1997 г. ( Приложение №4 ).

Однако, исследования БЕЗОПАСНОСТИ БАД к пище на основе природного минерала цеолита - «Литовит-М» были продолжены в 2000 году в лаборатории лекарственной токсикологии НИИ экспериментальной кардиологии под руководством доктора медицинских наук, профессора Арзамасцева Е.В .