Изучение физико-химических свойств, биологического и
клинического действия "ЭМ-курунги"
Блинов В.А. - зав. кафедрой БОБХ, профессор
БурАшина С.Н. - доцент
Суржина Е.А. - ассистент
Иванова Н.В. - ассистент
Мулинов Р.В. - аспирант
Сазонова И.А. - зав. лабораторией
Балашова А.Н. - инженер
ФГОУ ВПО "Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова"
(По материалам отчета, 2004 г.)
В ассортименте молочных продуктов весьма перспективной может оказаться курунга - кисломолочный продукт, используемый некоторыми народами нашей страны на протяжении многих столетий. Курунга не только высокопитательна, благодаря своеобразному химическому составу, но и представляет собой естественный симбиоз многих, эволюционно отобранных и генетически не модифицированных бактерий, дрожжей, грибов, обладающих значительными селективными преимуществами при выработке ценных биологически активных соединений.
Нами изучен состав курунги, ее некоторые физико-химические свойства, питательная ценность, влияние на организм мышей, крыс и крупного рогатого скота, оценено ее действие на биотехнологические процессы, а также влияние на организм практически здоровых людей.
При выработке кисломолочных продуктов протекают следующие важные процессы: молочнокислое и спиртовое брожение молочного сахара, свертывание основного белка молока казеина и гелеобразование. В результате этих процессов формируется консистенция, вкус и запах готовых продуктов. По характеру брожения молочного сахара кисломолочные продукты разделяются на две группы. К первой группе относятся продукты, в основе изготовления которых лежит главным образом молочнокислое брожение: простокваша, ацидофилин, ацидофильное молоко, йогурт, творог, сметана. Ко второй группе - продукты, при выработке которых происходит молочнокислое брожение и спиртовое брожение: кефир, кумыс, курунга и др.
Разнообразие кисломолочных продуктов очень велико: простокваша и варенец - в России, мацун - в Армении, мацони - в Грузии, катык - в Азербайджане и Средней Азии, чал - в Туркмении, курунга - в Северо-Восточной Азии, джугурт, айран и кефир - на Северном Кавказе, кумыс - в Башкирии, Казахстане и Татарии, ряженка на Украине, лебен - в Египте, йогурт в Болгарии, Румынии, Турции, Греции, погребное молоко в Норвегии и т.д.
Курунга - кисломолочный продукт, приготовляемый из коровьего молока, широко распространенный среди народов Центральной и Северной Азии (буряты, монголы, тувинцы и др.). Способ приготовления кисломолочного напитка и его производных, таких, как арса, базо, айраг, тарасун, был известен с давних пор.
По содержанию белков, жира и минеральных веществ, а также витаминов А и В курунга превосходит кумыс, уступая ему лишь по содержанию молочного сахара, спирта и витамина С (табл. 1). Большим достоинством курунги, по сравнению с кумысом, является дешевизна, доступность и простота приготовления. Чем сильнее развиваются дрожжи и связанное с ними спиртовое брожение, тем более жидкую консистенцию приобретает конечный продукт (консистенция кумыса). Брожение молочного сахара в курунге происходит очень энергично лишь в первое время, затем оно постепенно замедляется, и, наконец, почти совершенно прекращается. В первый день брожения, разлагается до 85% всего имеющегося сахара в молоке, на второй день - 9%, на третий день - 1,5%, а в последующие дни брожение почти вовсе прекращается (табл. 2).
Таблица 1
Химический состав курунги и кумыса (в%)
Таблица 2
Химический состав курунги в зависимости от сроков хранения (в %)
Курунга действует подобно кумысу, усиливает секреторно-моторную функцию пищеварительных желез, улучшает окислительно-восстановительные процессы, повышает реактивность и иммунобиологические свойства организма, изменяет состав крови, угнетает гнилостные процессы в кишечнике, обогащает организм витаминами и белком. Показаниями для лечения курунгой являются закрытые формы туберкулеза легких, плевриты, гастриты с угнетением секреции, ослабленная перистальтика кишечника, некоторые формы анемии, упадок питания и гиповитаминозы.
Препарат ЭМ-курунга содержит в себе многие виды пробиотиков, известных медицине. Их пробиотические свойства взаимно усилены настолько, что курунголечение может стать важным методом восстановления здоровья при самых разных заболеваниях.
Так, подавление гнилостных процессов в кишечнике свидетельствует о нормализации микрофлоры и способствует излечению гастритов, язвы, колитов, гепатитов, панкреатитов, холециститов и т.д. Уменьшается камнеобразование в желчном пузыре, почках, восстанавливаются все виды обмена. Нагрузка на поджелудочную железу, печень, почки уменьшается в десятки раз.
Ежедневный прием курунги восстанавливает способность внутренней микрофлоры контролировать ген вирулентности (болезнетворности) патогенных микроорганизмов. Этот контроль обеспечивает человеку достаточно надежную профилактическую защиту в период всевозможных эпидемий гриппа, гепатита, дизентерии, а также при септических и даже онкологических состояниях.
I. Физико-химические свойства ЭМ-курунги
Исследования проводились в соответствии с требованиями Государственной Фармакопеи (ГФ) X и XI, которые являются сборниками обязательных общегосударственных стандартов и положений, нормирующих качество лекарственных средств.
Как известно, состав ЭМ-курунги представляет собой естественный симбиоз лактобактерий, бифидобактерий и дрожжей. Сухая закваска кисломолочного напитка ЭМ-курунга предназначена для приготовления целебного кисломолочного напитка. Этот напиток с древнейших времен считается напитком бодрости и долголетия. Изготовленный по ЭМ-технологии, он вобрал в себя лечебные свойства практически всех известных препаратов, содержащих бифидо-, лакто-, уксуснокислые бактерии, дрожжи и т.д. Уникальный комплекс полезных микроорганизмов делает напиток максимально эффективным для профилактики и лечения дисбактериоза, стимуляции противовирусного и противоопухолевого иммунитета.
Все опыты проводились в трех повторностях. В зависимости от специфики реакций, рекомендуемых ГФ, использовали таблетки, сухую закваску для производства кисломолочного продукта ЭМ-курунги, либо ее 5% водную эмульсию.
В этих экспериментах определяли в курунге наличие солей аммония, уксусной кислоты, бромиды, иодиды, тартраты, нитриты, нитраты, соли закисного железа, мышьяка, калия, ртути и серебра. Установлено, что в исследованных образцах ЭМ-курунги не обнаружены иодиды, мышьяк, ртуть, серебро, тартраты, железо закисное, нитриты, нитраты и калий. Были зафиксированы следы бромидов, а на аммоний, ацетаты и цитраты реакции оказались слабо положительными.
Следовательно, ЭМ-курунга не содержит солей тяжелых металлов и ядовитых соединений, а в ней обнаруживаются нормальные метаболиты, характерные для белков, жиров, углеводов.
Для определения примесей и приблизительной оценки их количества препараты сравнивали с эталонами, содержащими определенные количества данной примеси. Муть и опалесценцию растворов наблюдали в проходящем свете на темном фоне.
Было установлено, что в образцах курунги опалесцеция превышала эталон. Следовательно, водные эмульсии курунги содержали хлориды и соляную кислоту.
Нами установлено, что согласно ГФ, ЭМ-курунга относится к практически нерастворимым препаратам, ибо необходимо более 1000 миллилитров растворителя (дистиллированная вода) для растворения 1 г препарата.
5%-ный водный раствор ЭМ-курунги относится к непрозрачным бесцветным жидкостям.
Содержание золы, нерастворимой в соляной кислоте, было равно 0,05%. Количество сульфатной золы составило 4%.
Плотность 5%-ного водного раствора ЭМ-курунги составляла 0,9985 г/см3, т.е. практически находилась на уровне воды.
Относительная вязкость раствора курунги практически не отличалась от вязкости воды и составляла 1,01±0,001.
Показатель преломления раствора ЭМ-курунги составлял в среднем 1,3345, т.е. был всего на 1,1% выше, чем у воды.
II. Питательная значимость ЭМ-курунги
1. Сухая закваска
В сухой закваске определялись 12 показателей - первоначальная влажность, гигроскопическая влажность, общая влага, "сырая" зола, "сырой" жир, "сырая" клетчатка, фосфор, кальций, общий азот, "сырой" протеин, аскорбиновая кислота, дубильные вещества. Содержание этих веществ характеризует химический состав сухой закваски. Опыты проведены в трех повторностях.
Полученные данные представлены в табл. 3 и 4. Итак, нами впервые определен физико-химический состав ЭМ-курунги, который характеризует сухую закваску как пищевой продукт. Что касается биохимических показателей, то в ЭМ-курунге достаточное количество азота и протеина. В ней обнаруживался "сырой" жир, фосфор, кальций и аскорбиновая кислота. В сухой закваске мы не установили наличие дубильных веществ, а содержание клетчатки составляло всего 1,2±0,5%.
Таблица 3
Физико-химический состав ЭМ-курунги
Таблица 4
Биохимический состав ЭМ-курунги
Результаты опытов позволяют считать, что закваска сухая для производства кисломолочного продукта ЭМ-курунга обладает характерными для продуктов аналогичного назначения физико-химическими свойствами и высокой питательной ценностью за счет значительного количества в ней белка, минеральных солей и аскорбиновой кислоты.
2. Кисломолочный напиток ЭМ-курунга
Напиток изготавливали согласно инструкции. Для этого одну дозу (2г) ЭМ-курунги заливали стаканом цельного молока (200 мл) жирностью 2%, перемешивали, плотно закрывали полиэтиленовой крышкой и оставляли заквашиваться при комнатной температуре на 3 суток. Жирность молока нормализовали кипячением и снятием верхнего отстоявшегося слоя. Опыт проводили в 3-х повторностях. В течение этих трех дней молоко перемешивали 3 раза в сутки для равномерного распределения микроорганизмов в закваске и усиления брожения. К концу 3-го дня молоко приобрело консистенцию кефира с характерным дрожжевым вкусом и легким привкусом уксусной кислоты, наблюдалось небольшое вспенивание.
Затем полученную закваску переливали в литровую банку и добавляли 200 мл молока. На 5-й день в закваску добавляли доверху молока (до 1 литра). Через сутки после этого считали, что напиток готов к употреблению.
Анализ кисломолочного продукта производили на 7 день. По органолептическим свойствам он представлял собой пенистый напиток кисловато-винного вкуса со своеобразным ароматом. В напитке ЭМ-курунга определяли содержание общего белка, казеина, лактозы, а также измеряли активную и титруемую кислотность. Установлено, что рН этого напитка (активная кислотность) составляло 3,3 0,0, а титруемая кислотность - 6,90 0,42 ?Т. Содержание общего белка и казеина в кисломолочном продукте соответственно составляло 2,61 0,30% и 2,10 0,26%, а концентрация лактозы была равна 2,37%.
Таким образом, исследованный нами напиток соответствует требованиям, предъявляемым к кисломолочным продуктам.
III. Опыты на мышах
1. Пирогенное, аллергенное, мутагенное действие курунги
ЭМ-курунга изучена по некоторым параметрам системы GLP (Good Laboratore Practicaе), отвечающей требованиям ГФ. На белых лабораторных мышах была исследована возможная токсичность, пирогенность, мутагенность, тератогенность и другие параметры курунги. Предварительно мы оценивали внешний вид подопытных мышей, их живую массу, состояние мочеиспускания, акт дефекации, поведенческие реакции, потребление корма и воды.
Установлено, что длительное, в течение 20 дней, введение мышам в желудок через зонд 1-1,5 мл 5%-ной водной эмульсии курунги не изменило у них поведенческих реакций, состояние шерстного покрова и слизистых, они были активными, подвижными, охотно поедали разнообразный корм.
Мочеиспускание и акт дефекации у подопытных мышей не отличались от нормы. За период опыта живая масса подопытных мышей увеличилась на 12,1% и составляла 28,80±1,45 г, при норме 23,80±1,49 г.
Курунга в острых и хронических опытах не вызывала у мышей повышения температуры тела, а также видимых уродств во втором поколении, т.е. препарат не обладал пирогенным и тератогенным действием. При закапывании 1%-ной водной эмульсии курунги в глаза мышам, втирание ее в эпиллированный участок кожи животных (ежедневно в течение трех дней) не наблюдалось каких-либо аллергических проявлений действия препарата.
Оценку мутагенного влияния препарата проводили методом подсчета аномальных головок сперматозоидов. Для этого мышам однократно вводили внутрижелудочно препарат в дозе 1 мл, и через три дня оценивали выход максимального числа поврежденных сперматозоидов. Число аномальных головок сперматозоидов у самцов опытной группы составило 1,0-11,2%, а в контрольной группе - 1,4-11,5%, что соответствует уровню, характерному для спонтанного повреждения головок сперматозоидов - 9,4-35,0% .
Результаты этих опытов позволяют считать, что ЭМ-курунга не обладает мутагенной активностью.
2. Влияние ЭМ-курунги на организм мышей
В этой серии наблюдений было сформировано две группы животных - контрольная и подопытная. Каждая группа включала по 6 особей обоих полов, внешне здоровых и активных. Мыши имели гладкий густой шерстный покров, глаза ярко-красного цвета, акты дефекации и мочеиспускания находились в пределах нормы.
2 г сухой закваски ЭМ-курунги делили на 8 равных частей (массой по 0,25 г). Каждую часть препарата смешивали с 1 мл теплой воды (t = 36-37°С) и вводили мышам подопытной группы внутрижелудочно при помощи микрошприца с полиэтиленовым зондом. Введение препарата осуществляли ежедневно в течение 20 дней.
В течение всего времени велись наблюдения за поведением и состоянием животных. Ни одно из животных за время эксперимента не погибло. Подопытные мыши не отличались от животных контрольной группы по внешнему виду, состоянию слизистых оболочек, активности, по потреблению корма и воды, а также по естественным отправлениям. В течение всего срока введения препарата подопытные мыши не проявляли неадекватных поведенческих реакций и ничем не отличались от контрольных. Некоторые отклонения (беспокойство, возбуждение, поддергивание отдельных групп мышц, учащенное дыхание) наблюдались в поведении мышей лишь в первые 2 часа после каждой дачи препарата и являлись, по-видимому, следствием стресса, возникающего после введения зонда в желудок животным. По окончании срока введения препарата мышей взвешивали, а после этого декапитировали, кровь и внутренние органы подвергли исследованиям.
При аутопсии цвет, размеры, эластичность, а также масса внутренних органов подопытных и контрольных мышей существенно не отличались.
Ряд внутренних органов мышей обеих групп между собой мало отличался. Хотя некоторая тенденция к увеличению массы органов (легкие, селезенка, сердце, почки) отмечалась у животных подопытной группы. Вместе с тем, мы не наблюдали возрастания массы печени, тимуса и надпочечников у мышей, получавших биопрепарат в течение 20 дней.
Установлено, что к концу эксперимента уровень гемоглобина в крови мышей подопытной группы составил 101,00±2,48 г/л, что на 19,77% выше по сравнению с контролем. При этом число эритроцитов увеличилось до 8,26±0,43 1012/л, а цветовой показатель возрос на 5,26%. Нужно отметить, что СОЭ контрольных мышей было 1,13±0,089 мм/ч, что несколько выше, чем у подопытных - 0,97±0,053 мм/ч.
Важно отметить расширение границ осмотической резистентности эритроцитов за счет снижения максимальной резистентности до 0,30±0,011% NaCl и увеличения минимальной резистентности до 0,50±0,014% NaCl. При этом число осмотически устойчивых эритроцитов возросло на 23,33%.
Под влиянием препарата ЭМ-курунга в крови подопытных животных увеличилось число лейкоцитов на 15,7% и составило 9,45±0,41·109/л, по сравнению с контролем - 8,17±0,35 109/л. Кроме того, несколько изменилось соотношение отдельных форм лейкоцитов.
Результаты биохимических исследований сыворотки крови приведены в табл. 5.
Таблица 5
Влияние ЭМ-курунги на биохимические показатели крови мышей
Из табл.5 видно, что под влиянием ЭМ-курунги у мышей подопытной группы возросло содержание в сыворотке крови общего белка на 23,3%, глюкозы - на 12,3%, мочевины - на 9,0%, уровень холестерина снизился на 9,6%. Активность аспартатаминотрансферазы увеличилась на 12,7%, а аланинаминотрансферазы - на 10,2%. Из этих изменений особенно значимым является увеличение в крови содержания общего белка и активности аминотрансфераз (последнее отражает тенденцию к повышению функции печени по переаминированию аминокислот).
Таким образом, сухая закваска ЭМ-курунга не вызывала негативных последствий для организма подопытных мышей. Напротив, прослеживается тенденция к улучшению морфологической картины и биохимического спектра некоторых показателей крови. В результате введения ЭМ-курунги у мышей наблюдалась интенсификация окислительно-восстановительных процессов как следствие увеличения числа эритроцитов и уровня гемоглобина; ослабление скрытых воспалительных процессов, а также некоторое усиление иммунологической устойчивости организма мышей. Мы наблюдали в крови у подопытных животных увеличение общего числа лейкоцитов и нивелирование дисбаланса их в лейкоформуле. Кроме того, отмечено улучшение протекания процессов обмена веществ, а также функционального состояния печени.
IV. Опыты на крысах
1. Изменение общего состояния крыс, получавших курунгу
В опытах были использованы белые беспородные крысы массой 250-300 г. Для адаптации крысы в течение семи дней находились в стандартных условиях лаборатории кафедры. Они получали разнообразный корм: зерновую смесь, морковь, капусту, свеклу, молоко и др., а воду ad libitum. Крысы были подвижны и активны, шерсть гладкая, чистая, кожные покровы и слизистые бледно-розового цвета.
После периода адаптации крыс в течение 7 дней поили вместо воды 5%-ной водной эмульсией курунги. Никаких отклонений в поведенческих реакциях животных как в течение эксперимента, так и после его завершения установлено не было: поведение крыс не изменилось, акты мочеиспускания и дефекации находились в норме, они активно поедали корм. Живая масса крыс за период опыта выросла в среднем на 4,7%.
При аутопсии крыс установлено, что расположение органов обычное, цвет органов и тканей соответствовал норме, кишечник перистальтировал. Ряд внутренних органов крыс обеих групп между собой не отличался, хотя отмечалась некоторая тенденция к уменьшению массы органов (легкие, селезенка, сердце, почки, надпочечники, тимус) у животных подопытной группы. Вместе с тем, мы наблюдали незначительное возрастание массы печени у крыс, получавших ЭМ-курунгу в течение 20 дней.
2. Инсулиноподобная активность ЭМ-курунги
Из более, чем пятидесяти гормонов млекопитающих и человека лишь инсулин обладает явно выраженным анаболическим действием. Для этого гормона характерно множество механизмов действия. Основным является усиленный транспорт глюкозы через плазматическую мембрану клеток. Молекулярные механизмы такого эффекта инсулина заключаются в том, что он, распластываясь на биомембране, повышает ее проницаемость к глюкозе, способствуя усиленному транспорту. Иными словами, инсулин действует по мембранному механизму и не проникает внутрь клетки. При недостатке инсулина развивается сахарный диабет, для которого характерно повышение порога чувствительности периферических тканей к глюкозе, т.е. глюкозы в организме больных достаточно, но она не может утилизироваться в клетках.
Впервые в наших опытах оценивалась эффективность инсулина в организме крыс под влиянием ЭМ-курунги.
Установлено, что под действием ЭМ-курунги наблюдается тенденция к более интенсивному включению глюкозы в мышечную ткань лабораторных крыс. Иными словами, препарат ЭМ-курунга обладает инсулиноподобной активностью и способен на молекулярном уровне регулировать транспорт глюкозы в клетках.
V. Опыты на крупном рогатом скоте
Опыты по изучению влияния биопрепарата ЭМ-курунга на организм коров симментальской породы проводили на базе СХПК "Аграрник" Саратовского района Саратовской области. Животные находились на начальной стадии лактации. Перед началом скармливания ЭМ-курунги у коров брали образцы крови и молока. Эти данные служили контролем. Затем в течение 20-ти дней ежедневно во время вечернего кормления коровам в дополнение к рациону, принятому в хозяйстве, скармливали ЭМ-курунгу по 2 г на голову в смеси с увлажненным зерновым концентратом. В течение всего периода наблюдения подопытные коровы отличались от коров основного стада повышенным аппетитом, лучшим состоянием волосяного покрова, были более активны.
1. Молочная продуктивность
Контрольные дойки проводили в начале и в конце опыта. Препарат своеобразно изменял среднесуточный удой молока.
Таблица 6
Изменение некоторых метаболитов крови коров(л/сутки)
Из данных табл. 6 следует, что на 20 день среднесуточные надои молока снизились у коров обеих групп, что связано со значительным ухудшением кормления (ноябрь-декабрь) и стельностью. Однако нами тем не менее установлено, что у контрольной группы коров среднесуточные удои молока снизились на 39%, по сравнению с началом опыта, а у опытной группы - всего на 17,3%. Это свидетельствует о том, что вводимая в рацион ЭМ-курунга способствует удержанию спада среднесуточных надоев молока на 21,7%, а удой молока коров в опытной группе к этому сроку наблюдения превышал данные контроля - на 33,3%.
2. Гематологические и биохимические показатели
Для исследования изменения гематологических и биохимических показателей на 21-й день эксперимента до начала утреннего доения и раздачи корма, т. е. натощак, у коров брали кровь из яремной вены.
Установлено, что скармливание ЭМ-курунги приводит к повышению в крови подопытных коров уровня гемоглобина на 10,1% и увеличению числа эритроцитов на 9,5%. Причем, величина цветового показателя указывала на их пропорциональное возрастание в крови подопытных животных.
Полученные данные косвенно свидетельствуют о способности препарата стимулировать окислительно-восстановительные процессы и улучшать снабжение тканей и органов кислородом. Кроме того, нами отмечена тенденция к уменьшению скорости оседания эритроцитов (СОЭ), что указывает на ослабление воспалительных процессов в организме животных. В результате введения ЭМ-курунги в рацион коров наблюдалось увеличение амплитуды резистентности эритроцитов за счет смещения верхней границы с 0,62 ±0,017% до 0,70±0,025% NaCl, а нижней - с 0,46±0,017% до 0,40±0,017% NaCl. При этом число осмотически устойчивых эритроцитов возросло на 13,0%, а число молодых форм эритроцитов - на 11,4%. Полученные данные указывают на потенциальную способность сухой закваски ЭМ-курунги стабилизировать биомембраны эритроцитов.
Общее число лейкоцитов после введения ЭМ-курунги в рацион коров возросло на 11,4%. Причем, наблюдалась тенденция к колебанию соотношения их отдельных форм. Зафиксированные изменения указывают на устранение диспропорции в лейкоцитарной формуле согласно физиологической норме для крупного рогатого скота и на усиление иммунологической устойчивости подопытных коров.
Результаты биохимических исследований представлены в таблице 7.
Таблица 7
Изменение некоторых метаболитов крови коров под влиянием ЭМ-курунги
Установлено, что после скармливания ЭМ-курунги в крови у коров за 20 дней увеличилась концентрация общего белка на 17,7%, мочевины на 30,1%, содержание глюкозы повысилось на 14,9%, холестерина - на 42,0%. Кроме того, на протяжении всего периода активность трансаминаз (аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы) в крови подопытных животных была выше, чем в контроле. Однако коэффициент де Ритиса свидетедьствует, что соотношение этих ферментов находится в пределах нормы. Полученные данные позволяют считать, что у коров симментальской породы под влиянием сухой закваски ЭМ-курунги усиливается обмен веществ, биосинтез белка и улучшается функциональное состояние печени.
Двадцатидневный курс применения ЭМ-курунги способствовал снижению аммиака в периферической крови коров на 14,3%. На 50% в крови подопытных коров увеличивается содержание глутамина. Это свидетельствует о более интенсивном переносе аммиака в печень и, видимо, дальнейшем метаболизировании его в орнитиновом цикле. Что касается активности аргиназы в крови, то она увеличивается после введения ЭМ-курунги на 50%, отражая повышенное расщепление аргинина на орнитин и мочевину. Подтверждением этому служит повышение в крови уровня орнитина, в среднем на 14,2%.
Таким образом, введение в течение 20 дней в рацион сухой закваски ЭМ-курунга оказывает позитивное действие на гематологические и биохимические показатели крови коров симментальской породы.
3. Изменение составных частей молока
Цельное молоко от исследуемых коров оценивали по физико-химическим и биохимическим показателям: плотность, кислотность (активная, титруемая), буферная емкость, содержание общего белка, молочного сахара, сухого вещества, кальция и фосфора. Полученные данные представлены в табл. 8 и табл. 9.
Из табл. 8 видно, что плотность, активная и титруемая кислотность в течение всего эксперимента находились на уровне контрольных значений. В то же время в молоке отмечена тенденция к увеличению буферной емкости на 11,1%, тогда как содержание сухого остатка, напротив, снижалось на 4%.
Полученные данные свидетельствуют о том, что двадцатидневное введение сухой закваски для получения кисломолочного продукта ЭМ-курунги практически не изменило физико-химических показателей молока
Таблица 8
Динамика физико-химических показателей молока
В наших экспериментах (табл. 9) содержание в молоке общего белка и казеина к концу исследования несколько снизилось, тогда как, концентрация сахара возросла на 17,6%. Вероятно это связано как с особенностями обменных процессов происходящих в организме животных, так и недостаточным кормлением.
Таблица 9
Влияние ЭМ-курунги на биохимические параметры молока
Что касается макроэлементов - кальция и фосфора, то в молоке наблюдалась тенденция к снижению этих показателей на 7% и 8,3% соответственно. Мы считаем, что применение ЭМ-курунги per os коровам в течение 20 дней существенно не изменяет качественный состав молока.
4. Исследование навоза крупного рогатого скота
У коров симментальской породы до опыта был проанализирован навоз на предмет содержания в нем различных паразитов. Исследование навоза проводили по методу Фюллеборна. Для анализа взята поверхностная пленка, в которой определялось наличие яиц цестод, нематод, ооцистов эймерий и яиц трематод. В контрольных образцах навоза, во всех пробах, обнаружены яйца Neoascaris vitulorum, другие паразиты не определялись.
Через 20 дней после перорального введения ЭМ-курунги, ежедневно по 2 г, навоз этих коров вновь был исследован на яйца и ооцисты указанных паразитов, в том числе и на яйца Neoascaris vitulorum. Препарат ЭМ-курунга при двадцатидневном введении коровам симментальской породы с кормом не вызывал появления в навозе яиц и ооцист каких-либо новых паразитов, напротив, ЭМ-курунга способствовала исчезновению в навозе яиц Neoascaris vitulorum. Эти исследования проведены профессором кафедры паразитологии и эпизоотологии Саратовского ГАУ Бычковой Л.В. и ассистентом этой же кафедры Свинцовым Р.В.
VI. Биологические эффекты ЭМ-курунги
1. Спиртовое брожение
Для изучения влияния ЭМ-курунги на спиртовое брожение готовили инкубационные смеси следующего состава: дрожжи:сахароза:вода в соотношении 1:50:200. В опытные пробы добавляли сухую закваску ЭМ-курунги в соотношении 1:500 (2 г на 1 л или 0,2 г на 100 мл инкубационной смеси). Инкубацию сред проводили в термостате при температуре 37°С. Через 5 дней от начала опыта дрожжи отделяли центрифугированием и в супернатанте титрометрическим методом определяли содержание спирта.
Установлено, что в контрольных пробах содержание спирта составило 5,63±1,03%, а в опытных - на 6,2% больше - 5,98±0,96%. Однако различия между группами были статистически недостоверными.
Таким образом, под действием ЭМ-курунги наблюдается тенденция к интенсификации процессов брожения углеводов и к увеличению продукции спирта. Можно предположить, что важную роль в этом играют дрожжи, входящие в состав биопрепарата, а также стимуляция ферментативных реакций на молекулярном уровне в пекарских дрожжах, вводившихся в инкубационную среду.
2. Лактазная активность
Как известно, молочнокислые бактерии (лактобактерии, бифидобактерии, стрептобактерии) интенсивно сбраживают лактозу до молочной кислоты. О степени сбраживания можно судить по уменьшению лактозы в инкубационной среде.
Для изучения влияния ЭМ-курунги, в составе которой находится естественный симбиоз многих микроорганизмов, на сбраживание лактозы к 5%-ому водному раствору этого дисахарида добавляли препарат из расчета 0,2 г на 100 мл. Инкубационную смесь помещали в термостат при температуре 370С. Лактозу в растворе определяли рефрактометрическим методом ежедневно в течение 3-х суток.
Установлено, что исходный показатель преломления раствора лактозы составлял 1,3430. Это соответствует 5%-ой концентрации дисахарида. В течение эксперимента этот показатель не изменялся, т.е. микроорганизмы ЭМ-курунги оказались индифферентными к процессу сбраживания лактозы в водном растворе. Однако полученные предварительные результаты могут и не отражать истинного положения дел и нуждаются в дальнейшем многовариантном исследовании.
VII. Изучение влияния ЭМ-курунги на организм здоровых людей
1. Общее состояние людей
В нашей лаборатории для 18 практически здоровых людей были заведены карты обследований. Эти люди не предъявляли каких-либо жалоб, воспитывались и росли в нормальных условиях, имели благоприятную наследственность. В их анамнезе фигурировали обычные заболевания детства (корь, паротит и др.), из вредных привычек - лишь один пациент курит в течение нескольких десятилетий. Среди обследованных не было людей, злоупотреблявших алкоголем и наркотиками. Условия труда, быта и образа жизни соответствовали параметрам, характерным для среднего жителя России.
При обследовании кожные покровы и слизистые оболочки были бледно-розового цвета, подкожно-жировой слой средней выраженности. Системное обследование подчелюстных, шейных, над- и подключичных, подмышечных, паховых лимфатических узлов не выявило их увеличения, болезненности или спаянности с кожей. При осмотре полости рта не установлены изменения со стороны языка, десен, зубов. Температура тела равнялась 36,60С.
При пальпации, перкуссии и аускультации обследованных не установлены какие-либо отклонения от нормы.
После двадцатидневного приема кисломолочного напитка (по 2 стакана в день), люди, которые находились под нашим наблюдением, ощущали прилив сил, настроение было бодрое и оптимистичное, сон хороший, значительно улучшился аппетит, следствием чего было увеличение массы тела на 1-2 кг. У многих обследованных нормализовался акт дефекации, исчезли отрыжка, изжога, уменьшился метеоризм. Интересные данные приводит П-ко. Через 7 дней после начала приема кисломолочного напитка, гриппом заболел супруг (эпидемия гриппа в Саратовской области), через 10 дней тяжело заболел гриппом свекор, а через 16 дней - свекровь. Сама же П-ко, несмотря на совместное проживание с указанными лицами, гриппом не заболела. Лишь один день (17 день) у нее отмечалась незначительная головная боль и сонливость. Эти явления полностью исчезли на следующий день.
Вместе с тем, у двух обследованных первые 2 дня после приема курунги отмечался жидкий стул, который затем нормализовался и был регулярным и обычным до конца наблюдения. Все пациенты отмечали, что к 9-11 дням напиток, как правило, терял свои вкусовые качества и приобретал неприятный запах. Это вынуждало готовить новую закваску курунги.
2. Электрокардиографические исследования
Результаты электрокардиографического исследования людей (ЭКГ 1 - 4 и ЭКГ 1а - 4а) оказались следующими.
Электрокардиограмма была прочитана (канд. мед. наук, профессор Н.В. Блинова) у практически здоровых людей и через 20 дней после ежедневного приема 2-х стаканов напитка ЭМ-курунга. До приема препарата на ЭКГ было зарегистрировано следующее: зубец Р, отражающий возбуждение обоих предсердий в норме, имеет продолжительность 0,08-0,1 сек и высоту 1- 2 мм. В наших исследованиях у всех пациентов ширина и высота этого зубца колебались в пределах указанной нормы. Интервал Р-Q указывает, как известно, на время прохождения электрического импульса от предсердий до желудочка. В норме он равен 0,12-0,20 сек. У обследуемых нами людей интервал Р-Q находился в пределах 0,12-0,17 сек, т.е. не отличался от принятой нормы.
Желудочковый комплекс QRS является показателем времени, в течение которого волна возбуждения успевает полностью охватить мускулатуру желудочков. В норме ширина комплекса составляет 0,06-0,1 сек, а по нашим данным, у практически здоровых людей она была равна 0,06-0,08 сек.
Интервал ST на ЭКГ у обследуемых не был смещен. Зубец Т, отражающий процесс прекращения возбуждения желудочков, положительный, длительность его - 0,06 сек, высота - 1,5-6 мм. Интервал Q-T, соответствующий электрической систоле желудочков, колебался в пределах 0,26-0,37 сек. Все эти параметры ЭКГ соответствовали норме (ЭКГ 1 - 4).
Следовательно, у всех обследованных людей до приема ЭМ-курунги ритм был синусовый, число сердечных сокращений колебалось в пределах 62-90 ударов, отмечалось нормальное положение электрической оси сердца.
Вместе с тем следует отметить, что у П-ко в отведении V3 на ЭКГ установлено нарушение внутрижелудочковой проводимости. У другого обследованного, Л-ва, наблюдались единичные желудочковые экстрасистолы в отведении V1.
После длительного приема ЭМ-курунги у всех практически здоровых людей электрокардиограмма не изменилась и соответствовала описанной выше норме (ЭКГ 1а - 4а), однако у всех обследованных существенно улучшились процессы реполяризации желудочков. Что касается П-ко, то у нее нормализовался процесс внутрижелудочковой проводимости, у Л-ва исчезли желудочковые экстрасистолы.
Таким образом, кисломолочный напиток ЭМ-курунга, принимаемый практически здоровыми людьми в течение 20-ти дней, нормализует, видимо, метаболические процессы в миокарде, что проявляется существенным улучшением всех электрокардиографических параметров.
3. Анализ мочи
Образование и выделение мочи контролируется центральной нервной и эндокринной системами, в первую очередь, гормоном задней доли гипофиза - вазопрессином. С мочой за сутки выделяется около 150 различных соединений, в том числе примерно 40 г органических и 20 г неорганических веществ. Определение суточного количества мочи и ее химического состава имеет важное практическое значение; при различных заболеваниях количественный и качественный состав мочи изменяется.
По нашим данным, у обследованных практически здоровых людей цвет свежевыпущенной мочи был соломенно-желтым, плотность ее колебалась от 1010 до 1018 кг/л, т.е. фактически соответствовала норме, рН мочи имел слабокислую или нейтральную реакцию. В моче всех обследованных людей не обнаруживался белок, сахар, кетоновые тела и пигменты крови. В моче регистрировалось от 2-4 до 3-6 лейкоцитов в одном поле зрения, в умеренных количествах в ней обнаруживался плоский эпителий.
Через 20 дней после ежедневного приема 2-х стаканов кисломолочного продукта ЭМ-курунга у обследованных людей физико-химические свойства мочи не изменялись, в ней не обнаруживалось каких-либо патологических составных частей: белка, сахара, ацетона, крови.
4. Общий анализ крови
Общий и химический состав крови в норме характеризуется постоянством и колеблется в узких пределах. Однако в случае заболеваний, при патологических синдромах или симптомах он может изменяться, что используется в целях диагностики.
Результаты общего анализа крови натощак и через 20 дней после ежедневного приема 2-х стаканов кисломолочного продукта ЭМ-курунга показали, что содержание гемоглобина практически не отличалось от исходного, составляя в среднем 97%. Аналогичные данные были характерными для эритроцитов, цветового показателя и лейкоцитов. Так, в конце наблюдения число эритроцитов составляло 97% от исходного уровня, цветовой показатель возрос на 3%, а число лейкоцитов на 4%. Неожиданным было среднее увеличение СОЭ на 86%, что, видимо, связано с эпидемией гриппа, прокатившейся в это время по Саратовской области. Вместе с тем, у обследованной Н-вой СОЭ оказалось сниженной на 50%. Полученные данные свидетельствуют о том, что ЭМ-курунга не оказала какого-либо существенного влияния на указанные гематологические показатели.
Длительное применение ЭМ-курунги более определенно действует на лейкоформулу. Так, число эозинофилов выросло на 84%, палочкоядерных - на 133%, моноцитов - на 28%. Вместе с тем, число сегментоядерных нейтрофилов практически не изменялось, по сравнению с нормой (повышение на 5%), тогда как число лимфоцитов снизилось на 25%.
Этот раздел гематологических исследований необходимо существенно расширить и углубить, ибо лейкоформула анализировалась всего у 2 - 4-х людей. Остальные по разным причинам (болезнь, перелом ноги, отсутствие молока в этот период и т.д.) не смогли вовремя провести общий анализ крови.
Заключение
В настоящее время все интенсивнее изучается роль непатогенных микроорганизмов в увеличении продуктивности животных, профилактике многих заболеваний, получении экологически чистой продукции и, в конечном счете, в нормализации и улучшении жизнеобеспечения людей.
Одним из наиболее перспективных в этом отношении является использование эффективных микроорганизмов, составляющих основу ЭМ-технологии, внедренной во многих странах мира. Детальное выяснение всего спектра действия препаратов эффективных микроорганизмов только начинается, и как всякая инновация встречает определенное противодействие и скепсис. Тем не менее, многочисленные отечественные и зарубежные исследования практически однозначно свидетельствуют о позитивной роли ЭМ-технологии в различных областях жизнедеятельности человека.
Нами впервые изучены физико-химические свойства ЭМ-курунги согласно требований Государственной Фармакопеи, а также оценено биологическое и клиническое действие ЭМ-курунги на мышах, крысах, коровах и у практически здоровых людей.
В результате установлены следующие факты:
1.В ЭМ-курунге обнаружены соли аммония, ацетатов, цитратов и бромидов. В ней отсутствовали йодиды, мышьяк, серебро, тартраты, закисное железо, нитриты, нитраты, калий. Водные эмульсии курунги содержали хлориды и соляную кислоту, мутность их не превышала эталон № 5Д. Они не прозрачны, плотность, вязкость и показатель преломления соответствовали аналогичным показателям воды. В навеске курунги содержалось 4,6% общей золы, 0,05% золы, не растворимой в соляной кислоте, и 4% сульфатной золы.
2. В сухой закваске ЭМ-курунга содержание общего азота составляло 14%, сырого протеина - 86,8%, сырого жира - 1,8%. В ней находились определяемые количества фосфора, кальция, аскорбиновой кислоты и др.. В препарате не установлено наличие дубильных веществ. Иными словами, препарат ЭМ-курунга обладает высокой питательной ценностью.
3. В кисломолочном напитке (7 день) активная кислотность была равна 3,3±0,0, титруемая - 6,90±0,420Т, содержание белка составило 2,61±0,30%, казеина - 2,10±0,26%, лактозы - 2,37±0,00%.
4. ЭМ-курунга не обладала ?-галактозидазной активностью и не сбраживала лактозу в водных растворах.
5. Впервые установлено, что ЭМ-курунга не обладает мутагенным, аллергенным, пирогенным действием, острой и хронической токсичностью.
6. Цитологические проявления ЭМ-курунги на периферическую кровь различных животных (мыши, коровы) свидетельствуют об усилении процессов кровеобразования (повышение содержания гемоглобина и эритроцитов), лейкопоэза, усилении иммунологической резистентности и уменьшении в организме скрытых очагов воспаления. Полученные результаты открывают новые перспективы общебиологического и прикладного характера.
7. У мышей, получавших ЭМ-курунгу, в крови возрастало содержание общего белка, глюкозы, мочевины и снижалась концентрация холестерина. Активность АсАТ и АлАТ в крови увеличивалось соответственно на 12,7 и 10,2%.
8. Молекулярные механизмы ЭМ-курунги проявляются более значительным транспортом глюкозы из инкубационной жидкости в мышечную ткань диафрагмы крыс.
9. Под влиянием длительного введения ЭМ-курунги в крови у коров симментальской породы, также, как и у мышей, наблюдалось повышение концентрации общего белка, мочевины, глутамина, глюкозы, активности трансаминаз, аргиназы, отмечалось возрастание уровня орнитина. В то же время ЭМ-курунга способствовала снижению в крови концентрации высокотоксичного аммиака.
10. В молоке коров, получавших с кормом ЭМ-курунгу, повысилась буферная емкость, активная кислотность, содержание лактозы. Остальные составные части молока (плотность, титруемая кислотность, содержание кальция, фосфора, сухого вещества) в контроле и опыте не отличались от нормы.
11. Впервые на эритроцитах крови мышей, коров симментальской породы установлено мембраннопротекторное действие ЭМ-курунги к изменению осмотического давления в культуральной жидкости.
12. ЭМ-курунга у здоровых людей повышала общее самочувствие, настроение, улучшала аппетит, ослабляла явления метеоризма, нормализовала акт дефекации, способствовала увеличению массы тела на 1-2 кг.
13. Через 20 дней после ежедневного приема 2-х стаканов кисломолочного напитка ЭМ-курунга у обследованных людей не изменялись физико-химические свойства мочи, в ней не обнаруживался белок, сахар, ацетон и кровь.
14. У практически здоровых людей через 20 дней после ежедневного приема кисломолочного напитка ЭМ-курунга в крови не изменилось по сравнению с исходным, содержание гемоглобина, число эритроцитов, цветового показателя, лейкоцитов, несколько возросло СОЭ, отмечена нормализация лейкоцитарной формулы.
15. Прием ЭМ-курунги не изменял основные параметры электрокардиограммы и, видимо, за счет регуляции метаболизма улучшал процессы реполяризации желудочков, нормализовал внутрижелудочковую проводимость, способствовал исчезновению желудочковых экстрасистол.